食品中喹諾酮檢測的固相萃取方法
（PolyClean X-HLB）
一、實驗目的
本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC法作為檢測手段。該方法可簡化樣品的前處理過程，節省有機溶劑的使用，操作簡便。
二、實驗目標物
依諾沙星(CAS:74011-58-8)，恩諾沙星(CAS:93106-60-6)，培氟沙星(CAS:70458-95-6)， 丹諾沙星(CAS:119478-55-6)
三、應用范圍
本方法適用于食品中喹諾酮的HPLC檢測及確證。
四、參考標準
《GB/T 21312-2007動物源性食品中14種喹諾酮藥物殘留檢測方法》
五、實驗材料
NuAnalyticalPolyCleanX-HLB固相萃取柱200mg/6mL。
六、實驗方法
1、 樣品待測溶液制備
稱取均質牛奶試樣5.0 g試樣(精確至0.001g)于50 mL離心管中，加入20 mLEDTA-Mellvaine緩沖溶液，1000r/min渦旋混合1min，超聲提取10min，10000r/min離心5 min(溫度低于5 ℃)，提取三次合并上清液。
2、活化
依次用6 mL甲醇和6 mL水活化。
3、上樣和洗脫
將提取液以2 mL/min的速度過柱，棄去濾液，用2 mL5%甲醇水溶液淋洗，棄去淋洗
液，將小柱抽干，再用6 mL甲醇洗脫并收集洗脫液。
4、重新溶解
50℃緩慢氮氣流條件下吹至近干，用1 mL 0.2 %甲酸水溶液溶解。1000 r/min渦旋混合1 min，經0.45 μm有機濾膜過濾，供HPLC測定。
5、HPLC條件
色譜柱：SuperLu C18 (250×4.6mm，5μm)
檢測器：UV@254 nm
流動相：A: 乙腈 B:0.1%甲酸的水溶液
柱溫：室溫
流速：1.0mL/min
進樣量：20μL
洗脫方式：梯度洗脫，洗脫程序如下：
|
時間/min |
A/% |
B/% |
|
0.00 |
9 |
91 |
|
11 |
9 |
91 |
|
20 |
29 |
71 |
|
25 |
37 |
63 |
|
26 |
100 |
0 |
|
30 |
100 |
0 |
|
31 |
9 |
91 |
|
36 |
9 |
91 |
七、實驗結果
1、1mg/kg牛奶基質中喹諾酮的添加回收結果
表1 1mg/kg牛奶基質中喹諾酮的添加回收結果
|
名稱 |
平均回收率（%） |
|
依諾沙星 |
92.8 |
|
丹諾沙星 |
82.4 |
|
培氟沙星 |
93.8 |
|
恩諾沙星 |
81.2 |
2、添加水平為1mg/kg牛奶基質中喹諾酮檢測色譜圖
圖1 添加水平為1mg/kg牛奶基質中喹諾酮檢測色譜圖
