學好液相色譜分析（HPLC）既需要系統理論學習，也需扎實的實驗實踐。以下為你梳理一份詳細的學習、成長與實用提升路線，兼顧初學者和進階需求：

一、理論基礎不可少

基礎化學知識

有機化學、分析化學、物理化學基本功。

掌握HPLC原理

分離機制：吸附、分配、離子交換、分子排阻等

色譜峰、柱效、理論塔板數、分離度、保留時間、死體積等基本概念

各類色譜模式（反相、正相、離子交換、手性、GPC等）

了解硬件結構

流動相儲備系統、泵、進樣器、色譜柱、檢測器（UV、DAD、MS等）、數據處理系統

儀器各部分原理及正確連接、日常維護知識

二、實驗與操作技能是關鍵

規范實驗操作

稱量、溶液配制、樣品前處理（萃取、過濾、稀釋等）

正確選擇、使用和保護色譜柱

流動相配制與脫氣、雜質控制等

儀器操作與維護

儀器開/關機步驟

日常進樣、洗脫、數據采集

泵、檢測器、進樣閥常見故障、空鼓排氣及小保養

色譜方法開發和參數優化

流動相選擇（極性/比例/PH/緩沖鹽/添加劑）

柱溫、流速、檢測波長、進樣量等優化

梯度洗脫與等度洗脫參數設計

三、數據解析與問題解決能力

色譜圖判讀

峰識別、保留時間、峰面積/高、分離度、理論塔板數等計算

識別拖尾、前沖、鬼峰、重疊峰、基線漂移等典型問題并初步分析

定性定量分析

標準物線的繪制（外標法、內標法）、最低檢測限、定量限計算

樣品未知物定性思路（保留時間、譜圖對比、與MS或其他檢測聯用）

排查并解決問題

常見問題如高壓、基線噪聲大、漏液、響應波動、峰丟失、色譜柱壽命短

確定是系統本身、色譜柱、流動相還是樣品處理問題

四、理論結合實踐——推薦學習步驟

系統自學書籍

推薦：《現代液相色譜技術》（呂勁松），《液相色譜基礎與實踐》（陳昆瑞），《Handbook of HPLC》（英文）

結合“文獻/公眾號/色譜論壇”補充常見案例和新技術

實際操作與帶教

在本單位實驗室主動申請參與HPLC相關實驗

跟隨有經驗老師/工程師做2-3個完整項目，練習樣品前處理、方法開發、數據處理全流程

善用廠商/網絡公開資源

閱讀廠家發布的操作手冊、常見故障排查電子書

加入“色譜經驗交流群”，與別人技術切磋，獲取實際解決方案

方法開發與創新嘗試

實踐“正相、反相、離子對、尺寸排阻”等多種模式

嘗試同一樣品在不同柱、不同流動相、不同梯度下優化，看效果差異，積累直覺

五、進階與個人特色

MS（質譜）、SFC（超臨界流體色譜）、UPLC等新技術學習

復雜樣品分離、雜質研究、痕量檢測能力提升

撰寫方法學論文、研究報告，參加同行研討以拓寬視野

六、常見誤區與建議

不要只懂開機進樣、不懂機制和數據判讀；實際效果很難突破

標準品自己配，真實樣品親自做，才能養成問題敏感度

色譜柱、流動相、參數變化對結果的影響，多做多思考

常做知識歸納筆記（Excel建立自己的“色譜問題庫”/“條件優化庫”）

七、結語&參考資料

液相色譜分析不難入門，難在精通。 理論和實踐并重，多做、多問、多總結。最終你會發現，HPLC分析是一項兼具規律性與創造性的技能，也是藥物化學、分析檢測、環境、食品等諸多領域的核心分析工具之一。

參考資源（強烈建議學習）

《色譜分析》李發美主編