色譜負(fù)峰原因總結(jié)及解析

在液相色譜（HPLC）等分析中，“負(fù)峰”是指色譜圖上基線向下產(chǎn)生的尖銳或?qū)掗煵ü龋愃频怪玫恼濉３霈F(xiàn)負(fù)峰時，實際表示檢測器信號相對于基線減少，而非增加，這屬于色譜異常現(xiàn)象之一。常見原因與解析如下：

1. 檢測器流動相錯配

發(fā)生原理：

檢測器流通池中充滿的參考流動相，與進(jìn)樣后的樣品溶劑或流動相成分不同（如溶劑極性、吸光度）。

比如，采用梯度洗脫時，進(jìn)樣溶液為強紫外吸收的純甲醇，而流動相主溶劑是甲醇和水的混合物，進(jìn)樣后檢測器接收到的吸光度比基線值小，出現(xiàn)負(fù)峰。

典型場景：

固定波長UV檢測時，進(jìn)樣溶劑比流動相更強吸光：負(fù)峰；

進(jìn)樣溶劑比流動相弱吸光：正峰（基線升高）。

2. 灰塵、氣泡或污染物的影響

某些污染物注入，改變了檢測池內(nèi)折光率、流動狀態(tài)，使基線突降后恢復(fù)，表現(xiàn)為負(fù)峰。

氣泡穿過檢測池，短時阻擋了光路，也可見負(fù)波動。

3. 衍生反應(yīng)導(dǎo)致產(chǎn)物信號降低

在線衍生檢測法中，如果反應(yīng)后產(chǎn)物的檢測信號（如吸光度）比反應(yīng)前的低，則目標(biāo)物的出峰為負(fù)信號。

比如某些成分與衍生試劑結(jié)合后吸收降低，出現(xiàn)負(fù)峰。

4. 檢測器極性誤接

某些檢測器如電化學(xué)檢測，如果正負(fù)極方向接反，則本應(yīng)正向的電流讀取為負(fù)信號。

5. 抑制方法流動相背景變化

離子色譜中常見離子抑制法，如果溶液isocratic與樣品的本底離子濃度變化使檢測器響應(yīng)降低，會生成負(fù)峰。

主要見于電導(dǎo)檢測時。

6. 樣品某組分對基線的吸附/化學(xué)反應(yīng)

樣品組分與流動相反應(yīng)、柱效或填料上發(fā)生吸附，使流動相本底吸收下降，形成負(fù)峰。

7. 數(shù)據(jù)采集、背景校正異常

檢測儀器初始時基線未校正，溶劑峰在校正區(qū)出現(xiàn)，信號被算法處理為負(fù)。

防范與排查建議

進(jìn)樣溶劑與流動相保持一致或相近，特別是UV檢測。

流動相徹底脫氣，避免氣泡。

定期清洗流通池、進(jìn)樣針和進(jìn)樣通路。

采用合適的流動相比例緩沖，對接雙色流動或梯度切換波長要慎重。

如梯度洗脫，注意樣品溶劑適配梯度初始流動相。

檢測器極性和零點及時校準(zhǔn)。

小結(jié)

色譜負(fù)峰多因檢測池內(nèi)溶劑本底、進(jìn)樣溶劑和流動相吸光度不同、氣泡、污染、極性反接、流動相本底波動等原因引起。

本質(zhì)上，負(fù)峰是檢測信號突然低于基線的表現(xiàn)，多為溶劑、參數(shù)或操作不當(dāng)所致。