液相色譜系統(tǒng)的許多問題都可以在譜圖上反映出來。
其中有一些問題可以通過改變設(shè)備參數(shù)得到解決;而其他的問題必須通過修改操作程序來解決。
對于色譜柱和流動相的正確選擇是得到好的色譜圖的關(guān)鍵所在。
	
A.峰拖尾
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				 原因  | 
			
				 解決辦法  | 
		
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				 1.篩板阻塞;  | 
			
				 1.a(chǎn).反沖色譜柱; b.更換進口篩板; c.更換色譜柱;  | 
		
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				 2.色譜柱塌陷;  | 
			
				 2. 填充色譜柱;  | 
		
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				 3.干擾峰;  | 
			
				 3. a.使用更長的色譜柱; b.改變流動相或更換色譜柱;  | 
		
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				 4.流動相pH選擇錯誤;  | 
			
				 4.調(diào)整pH值,對于堿性化合物,低pH值更有利于得到對稱峰;  | 
		
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				 5.樣品與填料表面的溶化點發(fā)生反應(yīng);  | 
			
				 5.a.加入離子對試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑。b.更改色譜柱。  | 
		
	
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				 原因  | 
			
				 解決辦法  | 
		
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				 1.柱溫低;  | 
			
				 1.升高柱溫;  | 
		
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				 2.樣品溶劑選擇不恰當;  | 
			
				 2.使用流動相作為樣品溶劑;  | 
		
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				 3.樣品過載;  | 
			
				 3.降低樣品含量;  | 
		
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				 4.色譜柱損壞;  | 
			
				 4.見A1、A2;  | 
		
	
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				 原因  | 
			
				 解決辦法  | 
		
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				 1.保護柱或分析柱污染;  | 
			
				 1.取下保護柱再進行分析;如果必要更換保護柱;如果分析柱阻塞,拆下來清洗;如果問題仍然存在,可能是柱子被強保留物質(zhì)污染,運用適當?shù)脑偕胧蝗绻麊栴}仍然存在,入口可能被阻塞,更換篩板或更換色譜柱。  | 
		
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				 2.樣品溶劑不溶于流動相;  | 
			
				 2.改變樣品溶劑;如果可能采取流動相作為樣品溶劑;  | 
		
	
	
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				 原因  | 
			
				 解決辦法  | 
		
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				 1.樣品過載;  | 
			
				 1.減少樣品載量;  | 
		
	
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				 原因  | 
			
				 解決辦法  | 
		
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				 1.樣品溶劑選擇不恰當;  | 
			
				 1. a.減少進樣體積; b.運用低極性樣品溶劑;  | 
		
	
	
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				 原因  | 
			
				 解決辦法  | 
		
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				 1.柱外效應(yīng);  | 
			
				 1. a.調(diào)整系統(tǒng)連接(使用更短、內(nèi)徑更小的管路); b.使用小體積的流通池;  | 
		
	
	
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				 原因  | 
			
				 解決辦法  | 
		
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				 1.二級保留效應(yīng),反相模式;  | 
			
				 1. a.加入三乙胺(或堿性樣品); b.加入乙酸(或酸性樣品); c.加入鹽或緩沖劑(或離子化樣品); d.更換一支柱子;  | 
		
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				 2.二級保留效應(yīng),正相模式;  | 
			
				 2. a.加入三乙胺(或堿性樣品); b.加入乙酸(或酸性樣品); c.加入水(或多官能團化合物); d.試用另一種方法;  | 
		
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				 3.二級保留效應(yīng),離子對;  | 
			
				 3.加入三乙胺(或堿性樣品);  | 
		
	
	
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				 原因  | 
			
				 解決辦法  | 
		
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				 1.緩沖不合適;  | 
			
				 a.使用濃度50~100mM的緩沖液; b.使用P ka等于流動相pH值的緩沖液;  | 
		
	
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				 原因  | 
			
				 解決辦法  | 
		
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				 1.樣品中有其他組份;  | 
			
				 1.正常;  | 
		
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				 2.前一次進樣的洗脫峰;  | 
			
				 2. a.增加運行時間或梯度斜率; b.提高流速;  | 
		
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				 3.空位或鬼峰;  | 
			
				 3. a.檢查流動相是否純凈; b.使用流動相作為樣品溶劑; c.減少進樣體積;  | 
		
	
	
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				 原因  | 
			
				 解決辦法  | 
		
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				 1.溫控不當;  | 
			
				 1.調(diào)好柱溫;  | 
		
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				 2.流動相組分變化  | 
			
				 2.防止變化(蒸發(fā)、反應(yīng)等);  | 
		
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				 3.色譜柱沒有平衡;  | 
			
				 3.在每一次運行之前給予足夠的時間平衡色譜柱;  | 
		
	
	
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				 原因  | 
			
				 解決辦法  | 
		
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				 1.流速變化;  | 
			
				 1.重新設(shè)定流速;  | 
		
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				 2.泵中有氣泡;  | 
			
				 2.從泵中除去氣泡;  | 
		
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				 3.流動相選擇不恰當;  | 
			
				 3. a.更換合適的流動相; b.選擇合適的混合流動相;  | 
		
	
	
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				 原因  | 
			
				 解決辦法  | 
		
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				 1.柱溫波動;(即使很小的溫度變化都會引起基線波動;通常影響示差檢測器、電導(dǎo)檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器;)  | 
			
				 1.控制好柱子和流動相的溫度,在檢測器之前使用熱交換器;  | 
		
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				 2.流動相不均勻;(流動相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移)  | 
			
				 2.使用HPLC級的溶劑,高純度的鹽和添加劑;流動相在使用前進行脫氣,使用中使用氦氣;  | 
		
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				 3.流通池被污染或有氣體;  | 
			
				 3.用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池;如有需要,可以用1N的硝酸。(不要用鹽酸)  | 
		
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				 4.檢測器出口阻塞;(高壓造成流通池窗口破裂,產(chǎn)生噪音基線)  | 
			
				 4.取出阻塞物或更換管子;參考檢測器手冊更換流通池窗;  | 
		
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				 5.流動相配比不當或流速變化;  | 
			
				 5.更改配比或流速;為避免這個問題可定期檢查流動相組成及流速;  | 
		
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				 6.柱平衡慢,特別是流動相發(fā)生變化時;  | 
			
				 6.用中等強度的溶劑進行沖洗,更改流動相時,在分析前用10~20倍體積的新流動相對柱子進行沖洗;  | 
		
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				 7.流動相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成;  | 
			
				 7.檢查流動相的組成;使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級的溶劑;  | 
		
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				 8.樣品中有強保留的物質(zhì)(高K’值)以饅頭峰樣被洗脫出,從而表現(xiàn)出一個逐步升高的基線。  | 
			
				 8.使用保護柱,如有必要,在進樣之間或在分析過程中,定期用強溶劑沖洗柱子。  | 
		
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				 9.使用循環(huán)溶劑,但檢測器未調(diào)整。  | 
			
				 9.重新設(shè)定基線;當檢測器動力學(xué)范圍發(fā)生變化時,使用新的流動相;  | 
		
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				 10.檢測器沒有設(shè)定在最大吸收波長處;  | 
			
				 10.將波長調(diào)整至最大吸收波長處;  | 
		
	
	
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				 原因  | 
			
				 解決辦法  | 
		
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				 1.在流動相、檢測器或泵中有空氣;  | 
			
				 1.流動相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣;  | 
		
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				 2.漏液  | 
			
				 2.見第三部分;檢查管路接頭是否松動,泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換泵密封。  | 
		
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				 3.流動相混合不完全  | 
			
				 3.用手搖動使混合均勻或使用低粘度的溶劑  | 
		
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				 4.溫度影響(柱溫過高,檢測器未加熱)  | 
			
				 4.減少差異或加上熱交換器  | 
		
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				 5.在同一條線上有其他電子設(shè)備  | 
			
				 5.斷開LC、檢測器和記錄儀,檢查干擾是否來自于外部,加以更正。  | 
		
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				 6.泵振動  | 
			
				 6.在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器  | 
		
	
	
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				 原因  | 
			
				 解決辦法  | 
		
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				 1.漏液  | 
			
				 1.見第三部分。檢查接頭是否松動,泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換密封。檢查流通池是否漏液。  | 
		
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				 2.流動相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成  | 
			
				 2.檢查流動相的組成。  | 
		
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				 3.流動相各溶劑不相溶  | 
			
				 3.選擇互溶的流動相  | 
		
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				 4.檢測器/記錄儀電子元件的問題  | 
			
				 4.斷開檢測器和記錄儀的電源,檢查并更正。  | 
		
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				 5.系統(tǒng)內(nèi)有氣泡  | 
			
				 5.用強極性溶液清洗系統(tǒng)  | 
		
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				 6.檢測器內(nèi)有氣泡  | 
			
				 6.清洗檢測器,在檢測器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器  | 
		
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				 7、流通池污染(即使是極少的污染物也會產(chǎn)生噪音。)  | 
			
				 7.用1N的硝酸(不能用磷酸)清洗流通池  | 
		
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				 8.檢測器燈能量不足  | 
			
				 8.更換燈  | 
		
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				 9.色譜柱填料流失或阻塞  | 
			
				 9.更換色譜柱  | 
		
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				 10.流動相混合不均勻或混合器工作不正常  | 
			
				 10.維修或更換混合器,在流動相不走梯度時,建議不使用泵的混合裝置  | 
		
	
	
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				 原因  | 
			
				 解決辦法  | 
		
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				 1.流動相組成變化  | 
			
				 1.重新制備新的流動相  | 
		
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				 2.流動相流速太低  | 
			
				 2.調(diào)節(jié)流速  | 
		
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				 3.漏液(特別是在柱子和檢測器之間)  | 
			
				 3.見section 3。檢查接頭是否松動、泵是否漏液、是否有鹽析出以及不正常的噪音。如果必要更換密封。  | 
		
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				 4.檢測器設(shè)定不正確  | 
			
				 4.調(diào)整設(shè)定  | 
		
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				 5.柱外效應(yīng)影響 a.柱子過載 b.檢測器對反應(yīng)時間或池體積響應(yīng)過大 c.柱子與檢測器之間的管路太長或管路內(nèi)徑太大 d.記錄儀響應(yīng)時間太長  | 
			
				 5. a.小體積進樣(例如:10μl而不是100μl)以1:10或1:100的比例稀釋樣品 b.減少響應(yīng)時間或使用更小的流通池 c.使用內(nèi)徑為0.007~0.01的短管路 d.減少響應(yīng)時間  | 
		
| 
				 6.緩沖液濃度太低  | 
			
				 6.增加濃度  | 
		
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				 7.保護柱污染或失效  | 
			
				 7.更換保護柱  | 
		
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				 8.色譜柱污染或失效,塔板數(shù)較低  | 
			
				 8.更換同樣類型的色譜柱。如果新柱子可以提供對稱的色譜峰,則用強溶劑沖洗舊柱子。  | 
		
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				 9.柱入口塌陷  | 
			
				 9.打開柱入口,填補塌陷或更換柱子  | 
		
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				 10.呈現(xiàn)兩個或多個未被完全分離的物質(zhì)的峰  | 
			
				 10.選擇其它類型的色譜柱以改善分離效果  | 
		
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				 11.柱溫過低  | 
			
				 11.提高柱溫。除非特殊情況,溫度不宜超過75℃  | 
		
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				 12.檢測器時間常數(shù)太大  | 
			
				 12.使用較小的時間常數(shù)  | 
		
	
	
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				 原因  | 
			
				 解決辦法  | 
		
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				 1.流動相污染或變質(zhì)(引起保留時間變化)  | 
			
				 1.重新配置流動相  | 
		
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				 2.保護柱或分析柱阻塞  | 
			
				 2.去掉保護柱進行分析。如果必要則更換保護柱。如果分析柱阻塞,可進行反沖。如果問題仍然存在色譜柱可能被強保留的污染物損壞,建議使用恰當?shù)脑偕绦颉H绻麊栴}仍然存在,進口可能阻塞了,更換入口處的篩板或更換色譜柱。  | 
		
	
	
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				 原因  | 
			
				 解決辦法  | 
		
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				 1.檢測器衰減設(shè)定過高  | 
			
				 1.減少衰減的設(shè)定  | 
		
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				 2.檢測器時間常數(shù)設(shè)定太大  | 
			
				 2.設(shè)定較小的時間常數(shù)  | 
		
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				 3.進樣量太少  | 
			
				 3.增大進樣量  | 
		
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				 4.記錄儀連接不當  | 
			
				 4.使用正確的連接  | 
		
	
	
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				 原因  | 
			
				 解決辦法  | 
		
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				 1.檢測器衰減設(shè)定過低  | 
			
				 1.采取較大的衰減  | 
		
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				 2.進樣過多  | 
			
				 2.減少進樣量  | 
		
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				 3.記錄儀連接不正確  | 
			
				 3.正確連接記錄儀  | 
		
	
	
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